人黑色素細胞抗體（MC Ab）試劑盒（ELISA）

使用說明書 貨號: SU-B10307

l  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣 本中人黑色素細胞抗體（MC Ab）的含量。

l  有效期：6個月

l  保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑盒采用一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人黑色素細胞抗體（MC Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并* 洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的人黑色素細胞抗體（MC Ab）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波

長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及要求

1.    血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測， 或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.    血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘， 或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.    細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃ 或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1.    酶標儀（450nm）

2.    高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.    37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.    標準品濃度依次為：240、120、60、30、15、7.5 U/mL

2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中 直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本 進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

1.    嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室 溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.    洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中 不要讓微孔干燥掉。

3.    消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

4.    底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5.    避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6.    在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.    平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.    任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞 試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9.    不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.    從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2.    設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；

3.    樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。

4.    除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體

100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.    棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙 上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6.    每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.    每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

實驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪

制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1.   檢測范圍：7.5 U/mL – 240 U/mL。

2.   靈敏度：zui低檢測濃度小于 1.0 U/mL。

3.   特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.   重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。