一、 生物學(xué)檢測(cè)法

　　TNF的主要 生物 學(xué)活性之一就是對(duì)某些腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。根據(jù)這一特點(diǎn)，可利用TNF敏感的靶細(xì)胞測(cè)定TNF活性，根據(jù)細(xì)胞死亡得出TNF的相對(duì)活性。該法的關(guān)鍵是選擇敏感特異的靶細(xì)胞。靶細(xì)胞可以是長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)的細(xì)胞系，也可以是新鮮分離的原代細(xì)胞（如瘤細(xì)胞）?，F(xiàn)以貼壁生長(zhǎng)的L929細(xì)胞為例，簡(jiǎn)述TNF活性的檢測(cè)原則。

　　兩種TNF均可傷體外培養(yǎng)的L929細(xì)胞，細(xì)胞死亡率與TNF活性成正比。某些染料如中性紅、結(jié)晶紫等能使活細(xì)胞染上相應(yīng)顏色，再用脫色液將染料脫出，通過(guò)測(cè)定其吸光度值間接監(jiān)沒(méi)細(xì)胞存活狀態(tài)。

　　試驗(yàn)原則是收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的L929細(xì)胞，用培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞至適當(dāng)濃度，加入培養(yǎng)板小孔中，置37℃，5％CO2 溫箱中培養(yǎng)16～24h，換液后，在各孔中加入不同稀釋度的待檢樣品，再加適當(dāng)濃度的放線菌素D和適量培養(yǎng)液，繼續(xù)溫育16～24h，棄培養(yǎng)液，經(jīng)Hanks液洗滌后，每孔加入適當(dāng)濃度的結(jié)晶紫染色液，37℃培養(yǎng)1h，使活細(xì)胞充分著色。

然后各孔加1％SDS短時(shí)溫育使染色細(xì)胞溶解，再以酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)各孔A 570nm 值。每次檢測(cè)均設(shè)培養(yǎng)液（陰性）對(duì)照和不同濃度的rTNF（陰性）對(duì)照。以使陰性對(duì)照50％細(xì)胞溶解的標(biāo)本最大稀釋倍數(shù)為T(mén)NF活性單位，以u(píng)/ml表示。

　　由于放線菌素D能抑制DNA的合成、降低靶細(xì)胞對(duì)損傷的修復(fù)機(jī)制，因而在檢測(cè)中加入放線素D可使靶細(xì)胞對(duì)TNF的敏感性增高10～200倍。

　　二、免疫學(xué)檢測(cè)法

　　通常采用ELISA，該法特異性高、敏感性強(qiáng)且快速使捷，而且能夠區(qū)別TNFα和TNFβ，為臨床檢測(cè)病人 血清 中TNF水平的有效方法，但不能反映TNF活性。

　　三、其它檢測(cè)法

　　檢測(cè)TNF還可用生物發(fā)光法及NAG微量酶反應(yīng)比色法。這類(lèi)方法是應(yīng)用生化技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)代謝的變化，從而推知靶細(xì)胞功能變化及死亡情況。其優(yōu)點(diǎn)是不僅反映細(xì)胞的死亡情況，而且能反映細(xì)胞的功能變化。此外，還具有快速、方便、微量的特點(diǎn)。