1.顯色反應(yīng) 取5mL指形管（要求透明度好）4支，2支為測(cè)定管，另2支為對(duì)照管，按表47–1加入各溶液。 混勻后，給1支對(duì)照管照上比試管稍長(zhǎng)的雙層黑色硬紙?zhí)渍诠猓c其他各管同時(shí)置于4000lx日光燈下反應(yīng)20-30 min(要求各管照光情況一致，反應(yīng)溫度控制在25～35℃之間，使酶活性高低適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)時(shí)間)。

當(dāng)樣品數(shù)量較大時(shí)，可在臨用前根據(jù)用量將表47–1中各試劑(酶液和核黃素除外)按比例混合后一次加入2.65mL，然后依次加入核黃素和酶液，使終濃度不變。

表 47-1 各溶液顯色反應(yīng)用量

3.SOD活性測(cè)定

至反應(yīng)結(jié)束后，用黑布罩蓋上試管，終止反應(yīng)。以遮光的對(duì)照管作為空白，分別在560nm下測(cè)定各管的OD值，計(jì)算SOD活性。

已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50%為一個(gè)酶活性單位表示，按下式計(jì)算SOD活性。 SOD總活性[u/g(FW)]=

式中：SOD總活性以酶單位每克鮮重表示。

比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。

ACK ——照光對(duì)照管的吸光度。

AE ——樣品管的吸光度。

VT ——樣品液總體積，mL。

V1 ——測(cè)定時(shí)樣品用量，mL。

W——樣品鮮重，g。

蛋白質(zhì)含量單位為mg/g。