ELISA技術(shù)自20 世紀(jì)70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展非常迅速，目前被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等許多領(lǐng)域。其基本原理是根據(jù)抗原或抗體能在一定條件下結(jié)合到固相載體的表面仍保持其免疫活性，抗原或抗體與酶結(jié)合形成的結(jié)合物仍能保持免疫學(xué)和酶的活性。結(jié)合物與相應(yīng)的抗原、抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入相應(yīng)的酶底物的顏色反應(yīng)來(lái)判斷有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，而且顏色的深淺與相應(yīng)的抗原或抗體的量在一定的范圍內(nèi)成正比。由于抗原、抗體的反應(yīng)在1 種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。了解實(shí)驗(yàn)原理后同時(shí)也必須做好實(shí)驗(yàn)的前期準(zhǔn)備。

一、儀器準(zhǔn)備：

酶標(biāo)儀（ELISA Reader），微量可調(diào)加樣器1套（10、20、100、200、1000 μL），恒溫培養(yǎng)箱，pH 計(jì)，沖洗器，洗滌瓶，康氏管，50 mL燒杯，吸管。96孔酶標(biāo)板或48孔酶標(biāo)板。

二、試劑準(zhǔn)備：

1）包被液：0.05 M pH9.6碳酸鹽緩沖液（Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, 加水至1000 mL，4℃可保存1周）。

2） 封閉液：5％ 脫脂奶粉或0.3％ BSA

3）洗滌液：0.15 M pH7.4 PBS-T（0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4?12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,加水至1000 mL，4℃保存）

4）底物液：pH5.0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液（0.1 M 檸檬酸24.3 mL，0.2 M磷酸鹽25.7 mL，加水50 mL，混勻），臨用前，在上述緩沖液中溶解40 毫克鄰苯二胺（Ortho-Phenglendiaruine, OPD），然后加入30%雙氧水0.15 毫升，底物對(duì)光敏感，需要避光并立即使用。

5） 陽(yáng)性對(duì)照液：1：100用HAT培養(yǎng)基稀釋的小鼠血清。陰性對(duì)照液為HAT培養(yǎng)基

6） 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG 酶標(biāo)結(jié)合物。

7） 2 M H2SO4

8） 抗原溶液